Histone Deacetylase 5 (HDAC5) Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400659-NIC

HDAC5 codifica a histona desacetilase 5, uma HDAC de classe IIa que modula a acessibilidade da cromatina e programas de transcrição ao se associar a complexos correpressores e ao desacetilar substratos histônicos e não histônicos. Sua atividade é regulada dinamicamente por um transporte núcleo-citoplasmático dependente de fosforilação, conectando a sinalização por cálcio e quinases ao controle da expressão gênica. A HDAC5 é um nó central em vias que governam a diferenciação muscular, a plasticidade neuronal e a transcrição responsiva ao estresse, incluindo redes dependentes de MEF2. A desregulação da função e da localização da HDAC5 tem sido implicada em estados epigenéticos anômalos associados à biologia do câncer, ao remodelamento cardíaco e a fenótipos neuropsiquiátricos, sustentando seu uso em estudos mecanísticos de regulação da cromatina.

Histone Deacetylase 5 (HDAC5) O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus HDAC5 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de HDAC5. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função HDAC5. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com HDAC5 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.