Histone Deacetylase 10 (HDAC10) Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403221-ACT

HDAC10 codifica a Histona Desacetilase 10, uma desacetilase dependente de zinco da família de HDACs de classe II que modula o estado de acetilação de substratos histónicos e não histónicos para moldar a acessibilidade da cromatina e os programas transcricionais. A HDAC10 tem sido associada à regulação da autofagia e de processos ligados aos lisossomas, contribuindo para vias de homeostase celular que influenciam a proliferação, a diferenciação e as respostas ao stresse. Por meio do controlo epigenético da expressão génica, a atividade da HDAC10 cruza-se com redes que regulam a estabilidade do genoma e a sinalização inflamatória. A desregulação da expressão ou da função de HDAC10 tem sido associada a fenótipos tumorais alterados e a outros estados transcricionais relevantes para doenças, tornando-a um nó útil para estudos mecanísticos de regulação epigenética.

Histone Deacetylase 10 (HDAC10) O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HDAC10 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Histone Deacetylase 10 (HDAC10) O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HDAC10 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HDAC10, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Histone Deacetylase 10 (HDAC10). Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HDAC10 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Histone Deacetylase 10 (HDAC10) no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Histone Deacetylase 10 (HDAC10) em células tumorais com expressão de HDAC10 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.