Histone Deacetylase 1 (HDAC1) Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400203-ACT

HDAC1 codifica a Histona Desacetilase 1, uma desacetilase de lisina de classe I que remove grupos acetil das caudas de histonas para compactar a cromatina e modular o output transcricional. Como componente catalítico central dos complexos repressores Sin3, NuRD e CoREST, a HDAC1 coordena a regulação epigenética da progressão do ciclo celular, da sinalização de dano ao DNA, de programas de diferenciação e do remodelamento da cromatina. A atividade de HDAC1 influencia a estabilidade do genoma por meio de efeitos no timing de replicação, no recrutamento de fatores de reparo e na repressão transcricional em loci responsivos. A expressão desregulada de HDAC1 ou a atividade de seus complexos é frequentemente associada a estados transcricionais alterados na biologia do câncer, a fenótipos do neurodesenvolvimento e a contextos de sinalização inflamatória, tornando-a um alvo amplamente usado para dissecação de vias.

Histone Deacetylase 1 (HDAC1) O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HDAC1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Histone Deacetylase 1 (HDAC1) O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HDAC1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HDAC1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Histone Deacetylase 1 (HDAC1). Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HDAC1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Histone Deacetylase 1 (HDAC1) no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Histone Deacetylase 1 (HDAC1) em células tumorais com expressão de HDAC1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.