hippocalcin CRISPR Activationプラスミド (m): sc-420938-ACT

Hpca は、神経細胞に豊富に発現する EF ハンド型のカルシウム結合タンパク質であるヒポカルシン（hippocalcin）をコードしており、活動依存的な Ca2+ の一過性上昇を下流シグナルへ結び付けるカルシウムセンサーとして機能する。ヒポカルシンは、Ca2+ によって調節されるタンパク質間相互作用の制御、ミリストイルスイッチングによる膜結合、ならびに神経伝達を形作るエンドサイトーシス関連過程の調節を通じて、シナプス可塑性の機構に関与する。マウスの脳回路では、Hpca の発現は神経細胞の興奮性や長期的なシナプス変化の調節と関連し、学習や記憶に影響する経路との結び付きが示唆されている。カルシウム恒常性とシナプスシグナル伝達の異常は、神経変性や神経精神疾患に関連する表現型（機序解明のための研究モデルで用いられるもの）において、ヒポカルシン関連ネットワークの関与を示している。

hippocalcin CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Hpcaの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

hippocalcin CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Hpca 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHpca転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性hippocalcinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHpca遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるhippocalcin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHpca発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるhippocalcin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。