HIPK2 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-402003-NIC

A HIPK2 (homeodomain-interacting protein kinase 2) humana é uma quinase de serina/treonina que integra sinais de estresse e de desenvolvimento ao fosforilar reguladores transcricionais, incluindo a p53, e ao modular complexos associados à cromatina. Participa das respostas a danos no DNA, de programas de apoptose e senescência e do controle transcricional por meio de vias ligadas à sinalização ATM/ATR, à regulação de Wnt/β-catenina e à expressão gênica responsiva a TGF-β. A HIPK2 também se conecta ao turnover dependente de ubiquitina e à dinâmica de corpos nucleares, moldando resultados de expressão gênica dependentes do contexto. A atividade e a expressão desreguladas de HIPK2 têm sido associadas a alterações no controle de checkpoints, a sinalização de sobrevivência aberrante e à biologia tumoral, tornando-a um nó relevante para estudos mecanísticos de estabilidade genômica e de transcrição adaptativa ao estresse.

HIPK2 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus HIPK2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de HIPK2. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função HIPK2. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com HIPK2 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.