Plásmido CRISPR de Activación (h) HIPK2: sc-402003-ACT

La HIPK2 humana (homeodomain-interacting protein kinase 2) es una quinasa de serina/treonina que integra señales de estrés y del desarrollo para regular la transcripción, la apoptosis, las respuestas al daño del ADN y los puntos de control del ciclo celular. Modula múltiples redes de señalización, incluidos los programas transcripcionales dependientes de p53, la señalización TGF-β/SMAD y las salidas de la vía Wnt/β-catenina, mediante la fosforilación de factores de transcripción y corre reguladores. La actividad de HIPK2 influye en la regulación génica asociada a la cromatina y puede afectar la senescencia y la diferenciación celulares. La desregulación de la expresión o de la señalización de HIPK2 se ha vinculado con alteraciones de las vías supresoras de tumores y con respuestas anómalas al estrés, lo que la convierte en un objetivo relevante para estudios mecanísticos en biología del cáncer y en modelos celulares relacionados con el estrés.

HIPK2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HIPK2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

HIPK2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HIPK2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HIPK2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HIPK2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HIPK2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HIPK2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HIPK2 en células tumorales con expresión de HIPK2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.