HIPK2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402003-ACT

A HIPK2 (homeodomain-interacting protein kinase 2) humana é uma quinase de serina/treonina que integra sinais de estresse e de desenvolvimento para regular a transcrição, a apoptose, as respostas a danos no DNA e os checkpoints do ciclo celular. Ela modula múltiplas redes de sinalização, incluindo programas transcricionais dependentes de p53, a sinalização TGF-β/SMAD e as saídas da via Wnt/β-catenina, por meio da fosforilação de fatores de transcrição e correpressores/coativadores. A atividade da HIPK2 influencia a regulação gênica associada à cromatina e pode afetar a senescência e a diferenciação celulares. A expressão ou sinalização desregulada de HIPK2 tem sido associada a alterações em vias supressoras de tumor e a respostas anômalas ao estresse, tornando-a um alvo relevante para estudos mecanísticos em biologia do câncer e em modelos relacionados de estresse celular.

HIPK2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HIPK2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HIPK2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HIPK2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HIPK2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HIPK2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HIPK2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HIPK2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HIPK2 em células tumorais com expressão de HIPK2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.