Plasmide CRISPR d'Activation (h2) HiNF-P: sc-416760-ACT-2

Le gène humain HINFP code le facteur de transcription HiNF-P, un régulateur spécifique de séquence qui coordonne l’entrée en phase S en activant l’expression des gènes d’histone H4 et en favorisant l’assemblage de la chromatine lors de la réplication de l’ADN. HiNF-P intervient dans le contrôle du cycle cellulaire via des interactions avec les réseaux de régulation liés à E2F/RB et contribue à la stabilité du génome en assurant le dépôt opportun des nucléosomes et le maintien de la chromatine couplé à la réplication. La dérégulation des programmes transcriptionnels associés à HINFP a été reliée à une prolifération anormale et à des états épigénétiques altérés observés dans le cancer et d’autres troubles impliquant un déséquilibre du cycle cellulaire. L’édition génétique de HINFP dans des modèles cellulaires humains permet des études mécanistiques de la régulation des gènes d’histones, des réponses au stress de réplication et de la dynamique de la chromatine, soutenant la cartographie des voies et les analyses de génomique fonctionnelle.

HiNF-P Le plasmide d'activation CRISPR (h2) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HINFP sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HiNF-P Le plasmide d'activation CRISPR (h2) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HINFP dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HINFP, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HiNF-P. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HINFP natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HiNF-P au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HiNF-P dans les cellules tumorales présentant une expression de HINFP silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.