Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
HIF1a Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-420856-NIC
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- HIF1aO plasmídeo de dupla Nickase (m) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase HIF1a (m) e o Plasmídeo Double Nickase HIF1a (m2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para Hif1a. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:HIF1a Anticorpo (28b): sc-13515
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
HIF1a Plasmídeo duplo de Nickase (m) | sc-420856-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HIF1a Plasmídeo duplo de Nickase (m2) | sc-420856-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
O gene Hif1a do camundongo codifica o fator induzível por hipóxia 1 alfa (HIF1a), um fator de transcrição sensível ao oxigênio que coordena a adaptação celular a baixas tensões de oxigênio. Em hipóxia, o HIF1a escapa da degradação mediada por prolil-hidroxilases e por VHL, forma um heterodímero com ARNT (HIF1β) e se liga a elementos de resposta à hipóxia para reprogramar a transcrição. Esse eixo de sinalização regula o metabolismo glicolítico, programas angiogênicos e eritropoiéticos, o manejo do ferro e a sobrevivência celular, interagindo com as vias PI3K–AKT–mTOR, MAPK e de estresse mitocondrial. A atividade desregulada de HIF1a é amplamente estudada em isquemia e em microambientes inflamatórios, bem como em modelos de hipóxia tumoral, nos quais a remodelação metabólica e a alteração da sinalização imune são características centrais.
HIF1a O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Hif1a em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Hif1a. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Hif1a. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Hif1a interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.