HIF PHD1 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-402824-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- HIF PHD1O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase HIF PHD1 (h) e o Plasmídeo Double Nickase HIF PHD1 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para EGLN2. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:HIF PHD1 Anticorpo (2G3): sc-293220
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
HIF PHD1 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-402824-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HIF PHD1 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-402824-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
O EGLN2 humano codifica a hidroxilase de prolina 1 do fator induzível por hipóxia (HIF PHD1), uma dioxigenase dependente de Fe(II)/2-oxoglutarato que hidroxila subunidades HIF-α para promover a ubiquitinação mediada por VHL e a degradação no proteassoma em normóxia. Ao acoplar a disponibilidade de oxigênio a programas transcricionais, a PHD1 ajuda a ajustar vias reguladas por HIF que controlam o metabolismo celular, a sinalização angiogênica, a eritropoiese e respostas adaptativas ao estresse. A atividade de EGLN2 interage com a função mitocondrial e o equilíbrio redox por meio do metabolismo do 2-oxoglutarato, conectando o sensoriamento de oxigênio a uma regulação metabólica mais ampla. A desregulação da sinalização EGLN2/PHD1 tem sido implicada em contextos de respostas à hipóxia alteradas e de remodelamento metabólico observados em múltiplos modelos relevantes para doenças, sustentando estudos mecanísticos da regulação gênica dependente de oxigênio.
HIF PHD1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus EGLN2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de EGLN2. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função EGLN2. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com EGLN2 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.