Hhip Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403293-ACT

O HHIP humano codifica a proteína de interação com Hedgehog (Hhip), uma glicoproteína associada à membrana que se liga a ligantes Hedgehog e atenua a sinalização da via ao limitar a disponibilidade do ligante para PTCH1/SMO. Ao atuar como regulador negativo da atividade de Hedgehog, o HHIP ajuda a ajustar programas de padronização do desenvolvimento e a homeostase de tecidos adultos, influenciando processos como diferenciação epitelial, sinalização estroma-epitélio e proliferação celular. A expressão desregulada de HHIP ou o desequilíbrio da via Hedgehog têm sido associados a fenótipos relevantes para doenças em oncologia e na biologia de doenças pulmonares crônicas, incluindo efeitos sobre o remodelamento das vias aéreas e redes de sinalização associadas a tumores. Como modulador da via, o HHIP é frequentemente estudado em contextos em que programas transcricionais dirigidos por Hedgehog se intersectam com sinalização WNT, TGF-β e inflamatória.

Hhip O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HHIP sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Hhip O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HHIP em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HHIP, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Hhip. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HHIP nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Hhip no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Hhip em células tumorais com expressão de HHIP silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.