HFE Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-403695-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- HFEO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase HFE (h) e o Plasmídeo Double Nickase HFE (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para HFE. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:HFE Anticorpo (C-12): sc-514405
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
HFE Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-403695-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HFE Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-403695-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
O HFE codifica uma proteína não clássica semelhante às do MHC de classe I, que se associa à β2-microglobulina e modula a ligação ao receptor de transferrina para regular a captação celular de ferro. Por meio dessa interação, o HFE ajuda a coordenar a detecção de ferro e a homeostase sistêmica do ferro em hepatócitos, enterócitos e macrófagos, influenciando a regulação da hepcidina e as vias de armazenamento de ferro. A disfunção do HFE altera o tráfego de ferro e as respostas ao estresse oxidativo, vinculando o gene a fenótipos de sobrecarga de ferro, como a hemocromatose hereditária, e a mecanismos subsequentes de lesão tecidual. Assim, o HFE é amplamente utilizado como modelo para estudar o metabolismo do ferro, a sinalização responsiva a metais e processos inflamatórios ou fibróticos impulsionados pelo ferro.
HFE O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus HFE em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de HFE. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função HFE. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com HFE interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.