HERG CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401143

概要

KCNH2は、心筋活動電位の第3相再分極を規定する速い遅延整流カリウム電流（IKr）の主要な担い手である、ヒトHERG電位依存性カリウムチャネル（Kv11.1）をコードする。HERG活性は、より広範なイオンチャネルネットワークおよび膜興奮性の制御プログラムと統合的に働き、活動電位持続時間、不応期、リズム形成を制御する。KCNH2機能の破綻は、QT延長症候群を含む遺伝性および後天性の不整脈表現型と強く関連しており、電気生理学および安全性薬理研究における中核的なノードである。心筋細胞にとどまらず、KCNH2の発現は、カリウム伝導が増殖や細胞シグナル状態に影響することから、興奮性・非興奮性のさまざまな文脈で検討されている。

HERG CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるKCNH2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、KCNH2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、KCNH2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、HERGタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、HERGシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、KCNH2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• HERGの機能に不可欠なKCNH2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、KCNH2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• HERG CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびHERG CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、KCNH2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  HERG HDRプラスミド（h）および HERG HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはKCNH2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のKCNH2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。