Herc5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404993-ACT

O gene humano HERC5 codifica a proteína Herc5, uma ligase E3 induzida por interferon que catalisa a conjugação de ISG15 (ISGuilação) a proteínas recém-sintetizadas, moldando a sinalização da imunidade inata e a restrição antiviral. A Herc5 atua na via de modificação por ISG15/ubiquitina-like, coordenando-se com enzimas E1/E2 para modular a estabilidade, a localização e as redes de interação de proteínas durante respostas ao interferon do tipo I. Ao regular a proteostase induzida por interferon e programas responsivos ao estresse, a HERC5 influencia vias ligadas ao reconhecimento de patógenos e à sinalização inflamatória. A ISGuilação desregulada e assinaturas de interferon têm sido associadas a patologia mediada pelo sistema imune e a interações entre tumor e sistema imune, tornando a HERC5 um alvo relevante para estudos mecanísticos em imunologia e biologia do câncer.

Herc5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HERC5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Herc5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HERC5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HERC5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Herc5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HERC5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Herc5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Herc5 em células tumorais com expressão de HERC5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.