Herc2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-420831-ACT

HERC2 de camundongo é uma grande ligase E3 de ubiquitina do tipo HECT que coordena a regulação dependente de ubiquitina da estabilidade proteica e da sinalização, integrando respostas a danos no DNA com o controle do ciclo celular. Ela participa de processos de manutenção do genoma, incluindo o manejo do estresse de replicação e a coordenação de vias de reparo, por meio da modulação, mediada por ubiquitina, de substratos-chave. A HERC2 também tem sido associada à função do centrossomo e à proteostase, conectando a sinalização por ubiquitina à dinâmica da cromatina e à homeostase celular. A desregulação de vias associadas à HERC2 é relevante para estudos de fenótipos de instabilidade genômica e de biologia do neurodesenvolvimento em sistemas de modelos mamíferos.

Herc2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Herc2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Herc2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Herc2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Herc2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Herc2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Herc2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Herc2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Herc2 em células tumorais com expressão de Herc2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.