Hepsin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405081-ACT

O gene humano HPN codifica a hepsina, uma protease serina transmembranar do tipo II localizada na superfície celular, onde regula a proteólise pericelular e a remodelação da matriz extracelular. A hepsina participa de sinalização dependente de proteases ao clivar substratos que podem modular a disponibilidade de fatores de crescimento, a adesão celular e o comportamento invasivo, conectando-a a vias que governam a organização epitelial e a homeostase tecidual. A expressão desregulada de HPN tem sido associada a alterações na diferenciação epitelial e a programas proteolíticos ligados a tumores, tornando-a relevante para o estudo de mecanismos de migração celular, integridade de barreira e comunicação cruzada com o microambiente. Como uma protease ancorada à membrana, a hepsina também é informativa para investigar redes de proteases e respostas transcricionais a jusante desencadeadas pela proteólise na superfície celular.

Hepsin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HPN sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Hepsin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HPN em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HPN, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Hepsin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HPN nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Hepsin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Hepsin em células tumorais com expressão de HPN silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.