hepcidin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403222-ACT

O gene humano HAMP codifica a hepcidina, um hormônio peptídico produzido pelo fígado que atua como regulador central da homeostase sistêmica do ferro. A hepcidina controla a absorção de ferro da dieta e a reciclagem de ferro por macrófagos ao se ligar ao exportador de ferro ferroportina (SLC40A1), induzindo sua internalização e degradação, reduzindo assim o efluxo de ferro para o plasma. Sua expressão é governada por sinalização de detecção de ferro e por sinalização inflamatória, incluindo a contribuição da via BMP/SMAD mediada por hemojuvelina e pelos complexos HFE/TFR2, bem como respostas de fase aguda mediadas por IL-6–STAT3. A atividade desregulada da hepcidina está associada a alterações na distribuição de ferro e no equilíbrio eritropoiético em distúrbios como hemocromatose hereditária, anemia da inflamação e anemias com sobrecarga de ferro, tornando o HAMP um ponto-chave para o estudo do metabolismo do ferro e das interações com a imunidade inata.

hepcidin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HAMP sem alterar a sequência de ADN subjacente.

hepcidin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HAMP em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HAMP, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de hepcidin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HAMP nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de hepcidin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via hepcidin em células tumorais com expressão de HAMP silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.