Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Helios Double Nickaseプラスミド (h2): sc-402984-NIC-2
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- Helios Double Nickaseプラスミド (h2)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- Heliosダブルニカースプラスミド（h2）およびHeliosダブルニカースプラスミド（h22）は、IKZF2を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: Helios 抗体 (E-7): sc-390357
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
Helios Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-402984-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ヒトIKZF2は、DNAに結合してリンパ球系譜のコミットメント、胸腺細胞の成熟、およびT細胞の機能的特化を規定する遺伝子発現プログラムを制御するIkarosファミリーの亜鉛フィンガー型転写因子Heliosをコードしている。Heliosは、TCR駆動の活性化、サイトカインシグナル応答、ならびに免疫寛容のエピジェネティック制御を形作るクロマチン関連の転写ネットワークに関与し、制御性T細胞（Treg）の安定性と免疫恒常性において重要な役割を担う。IKZF2/Heliosの発現や活性の変化は、T細胞分化状態の変動や白血病における転写プロファイルの変化を含む免疫調節異常や血液悪性腫瘍の文脈と関連していることが報告されている。IKZF2研究ツールは、CRISPRベースの摂動、レポーターアッセイ、マルチオミクス解析を用いたヒト免疫学モデルにおいて、転写因子の占有（結合）状況、遺伝子制御回路、ならびに細胞状態遷移の機序解明研究を支援する。
Helios ダブルニカースプラスミド（h2）は、human 細胞株における IKZF2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、IKZF2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、IKZF2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、IKZF2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。