HDGFRP3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h2): sc-416344-ACT-2

O HDGFRP3 humano (proteína 3 relacionada ao fator de crescimento derivado de hepatoma) codifica uma proteína nuclear associada à cromatina, implicada na regulação da transcrição e na dinâmica da cromatina por meio de interações com o DNA e com parceiros de ligação a ácidos nucleicos. O HDGFRP3 está associado a processos como controle do ciclo celular, proliferação e diferenciação, sendo frequentemente estudado no contexto da regulação epigenética e de programas de expressão gênica em células transformadas. Alterações na expressão de HDGFRP3 foram relatadas em diversos tipos de câncer, o que sustenta seu uso como um indicador molecular em estudos de vias focados em oncologia, sem implicar utilidade clínica. A edição gênica de HDGFRP3 em modelos de células humanas permite a dissecação mecanística de redes de sinalização dependentes de cromatina, o mapeamento de alvos transcricionais a jusante por ensaios de RNA-seq e baseados em ChIP, e triagens funcionais que investigam crescimento, respostas ao estresse e regulação do genoma.

HDGFRP3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h2) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HDGFRP3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HDGFRP3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h2) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HDGFRP3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HDGFRP3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HDGFRP3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HDGFRP3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HDGFRP3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HDGFRP3 em células tumorais com expressão de HDGFRP3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.