HDGF Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h2): sc-402859-LAC-2

O HDGF humano (fator de crescimento derivado de hepatoma) codifica uma proteína nuclear e secretada, ligante de heparina, capaz de atuar como fator mitogênico e pró-sobrevivência, com funções na progressão do ciclo celular, na regulação transcricional e em processos associados à cromatina. O HDGF está ligado a redes de sinalização que sustentam proliferação, migração e programas angiogênicos, e contribui para respostas ao estresse e remodelamento tecidual por meio de atividade autócrina/parácrina dependente do contexto. A expressão desregulada de HDGF foi relatada em múltiplos cânceres e em patologias fibróticas e vasculares, nas quais frequentemente se associa a fenótipos celulares agressivos e a interações alteradas com o microambiente tumoral. A perturbação genética de HDGF apoia estudos mecanísticos da biologia de fatores de crescimento, de motivos de translocação nuclear (por exemplo, ligação à cromatina mediada pelo domínio PWWP) e do mapeamento de vias a jusante em modelos de oncogênese, inflamação e fibrose.

As Partículas de Ativação Lentivirais HDGF (h2) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de HDGF numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais HDGF (h2) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição HDGF, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de HDGF. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo HDGF e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.