HDGF Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402859-ACT

O fator de crescimento derivado de hepatoma humano (HDGF) é uma proteína nuclear ligante de heparina que atua como regulador mitogénico e pró‑sobrevivência em múltiplos tipos celulares. O HDGF contribui para programas de controlo transcricional ligados à progressão do ciclo celular, a processos associados à cromatina e a respostas ao stress celular, e pode influenciar fenótipos migratórios e angiogénicos através de redes de sinalização responsivas a fatores de crescimento. A expressão desregulada de HDGF tem sido relatada em diversas neoplasias malignas e é frequentemente avaliada quanto à sua associação com o crescimento tumoral, a invasão e a remodelação do microambiente. Estas propriedades tornam o HDGF um alvo útil para estudos mecanísticos de proliferação, diferenciação e crosstalk entre vias oncogénicas em modelos celulares humanos.

HDGF O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HDGF sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HDGF O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HDGF em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HDGF, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HDGF. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HDGF nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HDGF no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HDGF em células tumorais com expressão de HDGF silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.