hDcp1a Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402543-ACT

DCP1A codifica hDcp1a, um componente central dos corpos de processamento citoplasmáticos (P-bodies), que servem de plataforma para o desencapeamento (decapping) de mRNAs e sua degradação no sentido 5′→3′. A hDcp1a coopera com a enzima de desencapeamento DCP2 e com ativadores de decapping para coordenar a renovação de mRNAs, a repressão translacional e o controle de qualidade de RNA, conectando respostas ao estresse a mudanças dinâmicas na expressão gênica. Por meio da regulação da estabilidade dos transcritos, DCP1A influencia vias como a degradação de mRNA mediada por códon de parada prematuro (nonsense-mediated mRNA decay), o silenciamento mediado por microRNAs e a comunicação cruzada entre grânulos de estresse e P-bodies. A desregulação da degradação de mRNA e da biologia dos P-bodies tem sido associada a alterações de proteostase e a programas de sinalização aberrantes observados em contextos de pesquisa em câncer e doenças neurodegenerativas.

Dcp1a O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DCP1A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Dcp1a O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DCP1A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DCP1A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Dcp1a. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DCP1A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Dcp1a no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Dcp1a em células tumorais com expressão de DCP1A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.