Hbb-bh1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420804

Übersicht

Hbb-bh1 kodiert eine embryonale β‑ähnliche Globin-Untereinheit, die während der frühen Mausentwicklung zur Hämoglobinassemblierung und zum Sauerstofftransport beiträgt. Seine Expression wird innerhalb des β‑Globin-Genclusters entwicklungsabhängig reguliert und mit den Erythroid-Differenzierungsprogrammen koordiniert, die durch transkriptionelle und epigenetische Regulatoren gesteuert werden. Hbb-bh1 ist an der Balance zwischen Häm und Globin sowie an der Redox-Homöostase in primitiven Erythrozyten beteiligt und steht damit in Verbindung mit Signalwegen, die die Erythrozytenreifung und die Reaktion auf oxidativen Stress beeinflussen. Eine Fehlregulation des Globin-Gen-Switchings und der Hämoglobinzusammensetzung ist relevant für die Modellierung von Hämoglobinopathien und für das Verständnis von Mechanismen, die die Spezifikation der erythroiden Linie prägen.

Das Hbb-bh1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Hbb-bh1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Hbb-bh1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Hbb-bh1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Hbb-bh1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Hbb-bh1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Hbb-bh1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Hbb-bh1-Exone abzielen, die für die Hbb-bh1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Hbb-bh1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Hbb-bh1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Hbb-bh1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Hbb-bh1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Hbb-bh1 HDR-Plasmid (m) und Hbb-bh1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Hbb-bh1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Hbb-bh1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.