Hbb-bh1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420804

概要

Hbb-bh1は、マウスの初期発生期におけるヘモグロビンの組み立てと酸素運搬に寄与する、胚性のβ様グロビンサブユニットをコードします。その発現はβグロビン遺伝子クラスター内で発生段階に応じて制御され、転写制御因子やエピジェネティック制御因子によって統御される赤血球系分化プログラムと協調しています。Hbb-bh1は、原始赤血球におけるヘムとグロビンのバランスおよびレドックス恒常性にも関与し、赤血球の成熟や酸化ストレス応答に影響する経路と結び付いています。グロビン遺伝子のスイッチングやヘモグロビン組成の制御異常は、ヘモグロビン異常症のモデル化や、赤血球系譜の運命決定を形作る機構の研究において重要です。

Hbb-bh1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるHbb-bh1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Hbb-bh1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Hbb-bh1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Hbb-bh1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Hbb-bh1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Hbb-bh1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Hbb-bh1の機能に不可欠なHbb-bh1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Hbb-bh1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Hbb-bh1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびHbb-bh1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Hbb-bh1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Hbb-bh1 HDRプラスミド（m）および Hbb-bh1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはHbb-bh1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のHbb-bh1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。