HB9 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402097-ACT

MNX1 codifica o fator de transcrição homeobox HB9, um regulador nuclear que controla programas de expressão gênica do desenvolvimento. O HB9 é mais conhecido por orientar a especificação e a diferenciação de neurônios motores na porção ventral da medula espinhal e por contribuir para decisões de linhagem pancreática, nas quais influencia redes transcricionais que governam o destino e a maturação celulares. Por meio da ligação ao DNA de forma sequência-específica, o HB9 se integra a vias mais amplas de sinalização do desenvolvimento e a processos de regulação da cromatina para moldar padrões de expressão gênica neuronal e endócrina. A expressão desregulada de MNX1/HB9 está associada a distúrbios congênitos de neurônios motores e já foi relatada em contextos de tumores hematológicos e sólidos, tornando-o um ponto útil para estudar diferenciação aberrante e controle transcricional.

HB9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MNX1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HB9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MNX1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MNX1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HB9. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MNX1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HB9 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HB9 em células tumorais com expressão de MNX1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.