HB-EGF CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400795

概要

HBEGFは、ヘパリン結合性EGF様増殖因子（HB-EGF）をコードしています。HB-EGFは膜係留型のリガンドであり、プロテアーゼによるシェディング（切断・遊離）によって放出され、EGFR/ERBBファミリー受容体を介してシグナルを伝達します。HB-EGFは下流のMAPK/ERK、PI3K–AKTなど、細胞増殖や生存に関わる経路を活性化し、上皮細胞および間質細胞の増殖、遊走、創傷応答プログラムを制御します。この軸は、腫瘍生物学、炎症性リモデリング、血管および心臓のストレス応答など、異常なEGFRシグナル伝達が関与する状況で頻繁に研究されています。HBEGFの発現動態は、ADAMメタロプロテアーゼ活性や、組織微小環境を形作る傍分泌／自己分泌性の増殖因子ネットワークとも相互に関連します。

HB-EGF CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるHBEGF遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、HBEGF内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、HBEGFのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、HB-EGFタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、HB-EGFシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、HBEGF欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• HB-EGFの機能に不可欠なHBEGFエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、HBEGFゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• HB-EGF CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびHB-EGF CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、HBEGF遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  HB-EGF HDRプラスミド（h）および HB-EGF HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはHBEGFホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のHBEGF標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。