HB-EGF Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400795-ACT

HBEGF codifica o fator de crescimento semelhante ao EGF com afinidade por heparina (HB-EGF), um ligante ancorado à membrana que pode ser liberado por clivagem proteolítica, gerando uma forma solúvel que se liga a EGFR e ERBB4. A sinalização de HB-EGF ativa MAPK/ERK, PI3K–AKT e programas transcricionais relacionados, que regulam a proliferação, a sobrevivência e a migração celulares, bem como interações epitélio–mesênquima. Está implicado na reparação de feridas, no remodelamento vascular e na sinalização inflamatória por meio de um crosstalk dependente do contexto com metaloproteases ADAM e componentes da matriz extracelular. A expressão desregulada de HBEGF e a ativação do eixo EGFR são frequentemente estudadas em biologia do câncer, fibrose e fisiopatologia cardiovascular como mecanismos que moldam transições de estado celular e respostas do microambiente.

HB-EGF O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HBEGF sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HB-EGF O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HBEGF em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HBEGF, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HB-EGF. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HBEGF nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HB-EGF no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HB-EGF em células tumorais com expressão de HBEGF silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.