HAX-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-423888-ACT

O gene murino **Hax1** codifica a **HAX-1**, uma proteína predominantemente associada às mitocôndrias e ao retículo endoplasmático, que regula a sobrevivência celular ao modular a apoptose, a homeostase do cálcio e as respostas ao estresse. A HAX-1 tem sido relacionada ao controle da integridade da membrana mitocondrial e à integração de vias de sinalização que influenciam a função dos leucócitos e a homeostase imune de forma mais ampla. Por meio de interações com componentes do citoesqueleto e com a maquinaria de tráfego vesicular, a HAX-1 também pode afetar a migração celular e o transporte intracelular. A desregulação de programas de sobrevivência dependentes de HAX-1 é relevante em modelos de disfunção hematopoética e inflamação, tornando-a um nó útil para estudos mecanísticos de vias de adaptação ao estresse.

HAX-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Hax1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HAX-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Hax1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Hax1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HAX-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Hax1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HAX-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HAX-1 em células tumorais com expressão de Hax1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.