HAP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405778

概要

HAP1（huntingtin-associated protein 1）は、ニューロンに豊富に発現する細胞質の足場（スキャフォールド）タンパク質で、ハンチンチンに結合し、輸送およびシグナル伝達複合体の形成・制御に関与します。HAP1は微小管依存性輸送、エンドソームのソーティング、ならびに小胞ダイナミクスに寄与し、受容体のリサイクリングや神経突起の伸長に影響を与えます。また、細胞骨格制御因子やモータータンパク質とも相互作用し、オルガネラや各種カーゴの細胞内分布を調節します。HAP1に連動した輸送およびプロテオスタシス（タンパク質恒常性）経路の変調は、ハンチントン病に関連する細胞ストレス表現型など、神経変性の機序を考えるうえで頻繁に研究されています。

HAP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるHAP1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、HAP1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、HAP1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、HAP1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、HAP1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、HAP1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• HAP1の機能に不可欠なHAP1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、HAP1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• HAP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびHAP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、HAP1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  HAP1 HDRプラスミド（h）および HAP1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはHAP1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のHAP1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。