G_{γ 10} Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m2): sc-420613-LAC-2

O gene Gng10 de camundongo codifica a subunidade γ10 da proteína G heterotrimérica, um componente ancorado à membrana da sinalização mediada por GPCR que se associa às subunidades Gβ para formar complexos Gβγ responsáveis por controlar a propagação de sinais dependente de receptor. O Gβγ derivado de heterotrímeros contendo GNG10 modula efetores como canais iônicos, adenilil ciclases e fosfolipase Cβ, moldando vias de segundos mensageiros que regulam a excitabilidade neuronal, a secreção e a dinâmica do citoesqueleto. Alterações na composição das subunidades de proteína G e na sinalização por Gβγ têm sido implicadas em distúrbios que envolvem neurodesenvolvimento e processamento sensorial, bem como migração e proliferação celular desreguladas, tornando o Gng10 um alvo relevante para estudos mecanísticos. A edição gênica de Gng10 em modelos murinos permite dissecar vias de redes de GPCR, mapear interações proteína–proteína dentro de complexos de proteína G e realizar triagens de genômica funcional que conectam entradas de receptores a fenótipos transcricionais e eletrofisiológicos a jusante.

As Partículas de Ativação Lentivirais Gγ 10 (m2) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Gng10 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Gγ 10 (m2) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Gng10, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de Gγ 10. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Gng10 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.