G_{γ 10} Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-420613-ACT

Gng10 codifica a subunidade gama 10 da proteína G de camundongo (Gγ10), um componente central das proteínas G heterotriméricas que conectam GPCRs ativados a efetores a jusante. Ao se associar a subunidades específicas de Gα e Gβ, a Gγ10 ajuda a controlar a localização na membrana e a intensidade/qualidade da sinalização, podendo influenciar a atividade da adenilil ciclase, a sinalização da fosfolipase C, a modulação de canais iônicos e respostas a jusante relacionadas a MAPK e PI3K. Essas vias regulam a comunicação celular, a secreção, a motilidade e programas de transcrição dependentes de estímulos em muitos tecidos. Alterações na dinâmica de sinalização GPCR–proteína G são amplamente relevantes para estudos de função neural, sinalização imune e reprogramação de sinalização associada ao câncer, tornando o Gng10 útil para experimentos de perturbação de vias em sistemas de modelos murinos.

Gγ 10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Gng10 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Gγ 10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Gng10 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Gng10, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Gγ 10. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Gng10 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Gγ 10 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Gγ 10 em células tumorais com expressão de Gng10 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.