G_{β 1} Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-420606-ACT

O gene **Gnb1** em camundongo codifica a subunidade **Gβ1** de proteínas G heterotriméricas, um parceiro obrigatório de **Gγ** que conecta **GPCRs** ativados a efetores a jusante. Complexos que contêm Gβ1 regulam a propagação de sinal para vias como **adenilato ciclase/AMPc**, **fosfolipase Cβ/fluxo de Ca²⁺**, modulação de canais iônicos e sinalização **MAPK**, moldando assim a neurotransmissão, a sinalização sensorial e as respostas hormonais. Por meio do controle da dinâmica de segundos mensageiros e da maquinaria de dessensibilização de receptores, a Gβ1 influencia decisões de estado celular, incluindo excitabilidade, proliferação e migração. A sinalização desregulada de GPCR–proteína G e a atividade alterada de **GNB1** têm sido associadas a fenótipos neurodesenvolvimentais e neurológicos e a desequilíbrios mais amplos de sinalização relevantes para processos oncogênicos e metabólicos em modelos experimentais.

Gβ 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Gnb1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Gβ 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Gnb1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Gnb1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Gβ 1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Gnb1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Gβ 1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Gβ 1 em células tumorais com expressão de Gnb1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.