G_{α 15} CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403266-ACT

GNA15は、ヘテロ三量体Gタンパク質のαサブユニットであるGα15をコードします。Gα15はGqファミリーの一員で、多様なGタンパク質共役受容体（GPCR）をホスホリパーゼC-β（PLC-β）の活性化へと結び付けます。このシグナル伝達軸は、イノシトール三リン酸（IP3）およびジアシルグリセロール（DAG）の産生、カルシウム動員、ならびにプロテインキナーゼC（PKC）依存的な転写プログラムを駆動し、免疫細胞および造血系細胞の活性化のあり方を規定します。Gα15は白血球系譜で高発現しており、受容体のカップリング特異性を拡張し得ることから、走化性、サイトカイン放出、ストレス応答性遺伝子発現に影響します。GPCR–Gα15シグナルの制御異常は、疾患関連の細胞状況において、異常な炎症シグナルや増殖因子経路およびMAPK経路活性の変化に関与することが示唆されています。

Gα 15 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GNA15の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Gα 15 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GNA15 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGNA15転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Gα 15の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGNA15遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGα 15依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGNA15発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGα 15経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。