G_{α 13} Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401180-ACT

GNA13 codifica a subunidade alfa Gα13 da proteína G heterotrimérica humana, um transdutor central de sinais de múltiplos GPCRs para vias de GTPases da família Rho. Após a ativação, a Gα13 interage com RhoGEFs como a ARHGEF12 (LARG), promovendo a remodelação do citoesqueleto dirigida por RhoA, a contratilidade celular e a regulação da adesão e migração celulares. Esse eixo de sinalização contribui para a função vascular e de células imunes e se conecta à mecanotransdução e a programas de expressão gênica que moldam a plasticidade celular. A sinalização desregulada de GNA13 tem sido associada a fenótipos alterados de invasão e sobrevivência em modelos de câncer, e alterações recorrentes em GNA13 foram relatadas em certas neoplasias hematológicas, sustentando sua relevância para pesquisas focadas em vias.

Gα 13 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GNA13 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Gα 13 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GNA13 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GNA13, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Gα 13. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GNA13 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Gα 13 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Gα 13 em células tumorais com expressão de GNA13 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.