G_{α 12} Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401264-ACT

GNA12 codifica a subunidade alfa Gα12 da proteína G heterotrimérica, um transdutor-chave de sinais de GPCR que se acoplam a vias da classe G12/13. Após a ativação, a Gα12 recruta fatores de troca de nucleotídeos de guanina (GEFs) de Rho para estimular a sinalização de RhoA, modulando a dinâmica do citoesqueleto de actina, a adesão celular, a migração e a contratilidade. Esse eixo de sinalização cruza-se com MAPK e outras redes responsivas ao estresse, influenciando programas transcricionais ligados a crescimento e a estímulos inflamatórios. A atividade desregulada de GNA12/Gα12 tem sido associada a motilidade aberrante e fenótipos invasivos em múltiplos contextos de câncer, tornando-a relevante para estudos mecanísticos de sinalização associada à metástase.

Gα 12 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GNA12 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Gα 12 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GNA12 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GNA12, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Gα 12. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GNA12 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Gα 12 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Gα 12 em células tumorais com expressão de GNA12 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.