G_{α 11} Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401653-ACT

GNA11 codifica a subunidade alfa Gα11 da proteína G heterotrimérica humana, um importante transdutor de sinais de GPCRs acoplados a Gq/11 para vias efetoras a jusante. Após a ativação do receptor, a Gα11 estimula a fosfolipase C-β, promovendo a produção de IP3/DAG, a mobilização de Ca2+ intracelular e a ativação da proteína quinase C, com efeitos posteriores sobre MAPK/ERK e programas transcricionais que controlam proliferação, secreção e diferenciação. A sinalização de GNA11 contribui para a regulação do tônus vascular, da função endócrina e da excitabilidade neuronal, e a desregulação desse eixo tem sido associada à sinalização oncogênica e a alterações no controle do estado celular em múltiplos contextos de doença. Como um nó proximal na transdução de sinal via GPCR, a Gα11 é frequentemente investigada para dissecar viés de via, respostas dependentes de cálcio e o crosstalk com a sinalização de fatores de crescimento.

Gα 11 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GNA11 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Gα 11 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GNA11 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GNA11, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Gα 11. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GNA11 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Gα 11 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Gα 11 em células tumorais com expressão de GNA11 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.