GSTM1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-418201-ACT

A glutationa S-transferase mu 1 (GSTM1) é uma enzima citosólica de desintoxicação de fase II que catalisa a conjugação da glutationa a xenobióticos eletrofílicos e a produtos endógenos da peroxidação lipídica, contribuindo para a homeostase redox e para a defesa celular contra o estresse oxidativo. A atividade da GSTM1 se relaciona ao metabolismo da glutationa, ao tamponamento de espécies reativas de oxigênio e às vias de carcinogênese química ao facilitar a depuração de intermediários reativos. Variações genéticas e polimorfismos de deleção em GSTM1 são amplamente estudados pelo impacto no processamento de xenobióticos e na suscetibilidade a lesão celular induzida por tóxicos. Alterações na expressão de GSTM1 têm sido associadas a diferenças na sinalização inflamatória e em fenótipos de resposta ao estresse relevantes para a biologia do câncer, doenças pulmonares e pesquisa em metabolismo de fármacos.

GSTM1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GSTM1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GSTM1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GSTM1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GSTM1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GSTM1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GSTM1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GSTM1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GSTM1 em células tumorais com expressão de GSTM1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.