GSDMDC1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-427312-ACT

Gsdmd codifica a gasdermina D (GSDMDC1), um efetor formador de poros da morte celular inflamatória que é ativado por clivagem proteolítica a jusante da sinalização canônica e não canônica do inflamassoma. Uma vez clivada pela caspase-1 ou pela caspase-11, a porção N-terminal oligomeriza-se na membrana plasmática para formar poros, promovendo a piroptose e facilitando a liberação de citocinas como IL-1β e IL-18. Essa atividade conecta o reconhecimento imune inato à lise celular e às respostas de reparo de membrana, integrando-se a vias que controlam a maturação de citocinas, a liberação de alarminas e a defesa antimicrobiana. A atividade desregulada da gasdermina D está implicada em modelos murinos de autoinflamação, inflamação sistêmica do tipo sepse e contextos de lesão tecidual nos quais a morte celular induzida por inflamassoma molda a sinalização imune associada à doença.

GSDMDC1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Gsdmd sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GSDMDC1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Gsdmd em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Gsdmd, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GSDMDC1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Gsdmd nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GSDMDC1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GSDMDC1 em células tumorais com expressão de Gsdmd silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.