Plásmido CRISPR de Activación (h) GSDMDC1: sc-406596-ACT

GSDMD (gasdermina D; también mencionada como GSDMDC1) codifica un efector formador de poros de la muerte celular inflamatoria que se activa mediante escisión proteolítica aguas abajo de la señalización del inflamasoma. Tras la escisión por las vías de caspasa-1 o caspasa-4/5/11, el fragmento N-terminal se oligomeriza en las membranas para inducir piroptosis y favorecer la liberación de citocinas de la familia IL-1, vinculando el reconocimiento inmunitario innato con una muerte celular lítica. Este eje se integra con NLRP3 y vías relacionadas del inflamasoma, moldeando la defensa antimicrobiana y la inflamación estéril. La actividad desregulada de GSDMD se ha implicado en estados inflamatorios crónicos, modelos de inflamación asociada a sepsis e interacciones tumor–sistema inmunitario, lo que impulsa estudios mecanísticos de la muerte celular y la biología de las citocinas en sistemas humanos.

GSDMDC1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GSDMD sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GSDMDC1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GSDMD en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GSDMD, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GSDMDC1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GSDMD y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GSDMDC1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GSDMDC1 en células tumorales con expresión de GSDMD silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.