GRK 6 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402061-ACT

A GRK6 humana (quinase 6 de receptores acoplados à proteína G, G protein-coupled receptor kinase 6) é uma quinase de serina/treonina que fosforila GPCRs ativados para promover o recrutamento de β-arrestina, a dessensibilização do receptor e o tráfego endocítico. Ao moldar a dinâmica de sinalização dos GPCRs, a GRK6 influencia cascatas a jusante de segundos mensageiros e de quinases, incluindo cAMP/PKA e MAPK/ERK, afetando a migração celular, a sinalização inflamatória e respostas neuronais. A GRK6 tem sido estudada no contexto da regulação de receptores de quimiocinas e do tráfego de células imunes, com associações relevantes para doenças descritas em processos neuroinflamatórios, desregulação da sinalização cardiovascular e remodelamento de vias de GPCR associado ao câncer. Seu nível de expressão endógena e sua atividade dependente do contexto tornam a GRK6 um nó útil para investigar viés de receptor, amplitude de sinalização e feedback adaptativo em redes de GPCR.

GRK 6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GRK6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GRK 6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GRK6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GRK6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GRK 6. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GRK6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GRK 6 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GRK 6 em células tumorais com expressão de GRK6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.