GRK 3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403415-ACT

A GRK3 humana (G protein-coupled receptor kinase 3, ADRBK2) é uma quinase de serina/treonina que fosforila GPCRs ativados para promover o recrutamento de β-arrestina, a dessensibilização do receptor e o tráfego endocítico. Ao modular a amplitude e a duração do sinal dos GPCRs, a GRK3 influencia vias a jusante, incluindo sinalização cAMP/PKA, PLC–PKC e MAPK/ERK, com efeitos amplos sobre a responsividade celular a hormônios, neurotransmissores e quimiocinas. Alterações na expressão ou na atividade da GRK3 têm sido associadas a programas de sinalização de receptores desregulados, relevantes para a regulação inflamatória, a sinalização neurológica e fenótipos oncogênicos, tornando-a um nó útil para dissecar o controle de vias de GPCR. Estudos sobre GRK3 comumente se concentram em viés específico do receptor, regulação por feedback e comunicação cruzada entre a sinalização mediada por proteína G e por β-arrestina.

GRK 3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GRK3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GRK 3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GRK3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GRK3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GRK 3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GRK3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GRK 3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GRK 3 em células tumorais com expressão de GRK3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.