GRASP65 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-402436-NIC

GORASP1 codifica a GRASP65, uma proteína periférica de membrana do complexo de Golgi que ajuda a manter a arquitetura das pilhas do Golgi e sustenta o empilhamento das cisternas e a formação do “ribbon” (rede) por meio de oligomerização regulada e de interações com golginas e fatores de ancoragem de vesículas. A GRASP65 contribui para a remontagem do Golgi após a mitose e participa do tráfego de membranas e da triagem de proteínas ao longo da via secretora, influenciando o processamento de cargas dependente de glicosilação. Sua dinâmica dependente de fosforilação conecta a organização do Golgi à progressão do ciclo celular e a respostas ao estresse que remodelam compartimentos secretórios. Alterações na estrutura do Golgi e em programas de tráfego envolvendo a GRASP65 têm sido associadas a estados patológicos caracterizados por proteostase comprometida e secreção aberrante, incluindo neurodegeneração e aspectos da biologia celular relacionados ao câncer.

GRASP65 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus GORASP1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de GORASP1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função GORASP1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com GORASP1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.