GRASP65 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402436-ACT

O gene humano **GORASP1** codifica a **GRASP65**, uma proteína periférica de membrana que se localiza no **cis-Golgi** e atua como um organizador-chave da arquitetura da **fita (ribbon) do Golgi**. A GRASP65 contribui para o empilhamento do Golgi, a ancoragem (tethering) de vesículas e a remontagem das membranas do Golgi durante a entrada e a saída da mitose, integrando-se ao tráfego do RE para o Golgi e ao controle mais amplo da via secretória. Por meio de suas funções na organização de organelas e no processamento de carga, a GRASP65 influencia a triagem de proteínas, a glicosilação e o transporte polarizado, processos centrais para a progressão do ciclo celular e para respostas ao estresse. A desregulação da estrutura do Golgi e das vias de tráfego que envolvem a GRASP65 é relevante para fenótipos associados a doenças na biologia do câncer e na neurodegeneração, nas quais são comumente observadas secreção alterada e remodelamento de organelas.

GRASP65 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GORASP1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GRASP65 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GORASP1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GORASP1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GRASP65. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GORASP1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GRASP65 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GRASP65 em células tumorais com expressão de GORASP1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.