granzyme B Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401469-ACT

O GZMB humano codifica a granzima B, uma protease de serina do tipo tripsina armazenada em grânulos citotóxicos de células T CD8+ e células NK, que medeia a morte de células-alvo após entrega dependente de perforina. A granzima B cliva substratos-chave para ativar a apoptose dependente de caspases e também pode acionar vias de morte independentes de caspases por meio de perturbações mitocondriais, ligando-a a programas efetores imunológicos a jusante do reconhecimento de antígenos e da sinalização inflamatória. A expressão e a atividade desreguladas de GZMB têm sido associadas a lesão e remodelamento tecidual mediados pelo sistema imune em inflamação crônica e autoimunidade, bem como a alterações na vigilância citotóxica em contextos de câncer e infecção viral. Como resultado, o GZMB é amplamente usado como marcador funcional de ativação de linfócitos citotóxicos e como um nó mecanístico para estudar apoptose, a biologia da sinapse imune e a imunopatologia.

granzyme B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GZMB sem alterar a sequência de ADN subjacente.

granzyme B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GZMB em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GZMB, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de granzyme B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GZMB nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de granzyme B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via granzyme B em células tumorais com expressão de GZMB silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.