granzyme A Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403958-ACT

O gene humano **GZMA** codifica a **granzima A**, uma protease serina do tipo triptase armazenada nos grânulos de linfócitos citotóxicos e liberada durante o engajamento da sinapse imune para promover dano à célula-alvo e sinalização inflamatória. A granzima A contribui para mecanismos citotóxicos independentes de caspases e pode modular vias associadas a respostas a danos no DNA, disfunção mitocondrial e produção de citocinas nas células afetadas. Sua expressão e atividade são estudadas no contexto da vigilância imunológica antiviral e antitumoral, bem como de programas citotóxicos desregulados associados à autoimunidade e à inflamação crônica. Como o **GZMA** é um marcador de células T citotóxicas e células NK ativadas, ele é frequentemente utilizado para investigar transições de estado de células imunes, função efetora e dinâmicas imunológicas do microambiente.

granzyme A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GZMA sem alterar a sequência de ADN subjacente.

granzyme A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GZMA em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GZMA, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de granzyme A. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GZMA nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de granzyme A no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via granzyme A em células tumorais com expressão de GZMA silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.