granulysin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403208-ACT

O GNLY humano codifica a granulisina, uma proteína efetora citolítica e pró-inflamatória armazenada em grânulos citotóxicos de células NK e de células T CD8+ ativadas. Após a formação da sinapse imune, a granulisina é liberada para promover atividade antimicrobiana e contribuir para a morte de células-alvo em conjunto com a perforina e as granzimas, moldando as respostas imunes inata e adaptativa. A expressão de GNLY está ligada a programas de ativação linfocitária e a estados de diferenciação citotóxica, e sua desregulação é estudada em contextos de disfunção imune, infecção crônica, vigilância imune contra tumores e mecanismos de doenças inflamatórias. Como um indicador da biologia de linfócitos citotóxicos, o GNLY é frequentemente utilizado como marcador e mediador funcional em pesquisas de imunologia e de interação hospedeiro–patógeno.

granulysin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GNLY sem alterar a sequência de ADN subjacente.

granulysin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GNLY em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GNLY, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de granulysin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GNLY nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de granulysin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via granulysin em células tumorais com expressão de GNLY silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.