GRAMD1B CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-408929

概要

GRAMD1B（GRAM domain-containing 1B）は、小胞を介さない脂質輸送に関与する、ER（小胞体）膜にアンカーされたコレステロール輸送タンパク質であり、小胞体—形質膜のコンタクトサイトで機能します。StART様ドメインを介して利用可能なコレステロールに結合し、形質膜のホスホイノシチドシグナルに応答することで、GRAMD1Bはコレステロール恒常性、膜構造の維持、脂質依存的なシグナル伝達に寄与します。これらの過程は、ステロールセンシング、ERストレス応答、さらに細胞の増殖・生存プログラムに影響する広範な代謝制御と交差しています。GRAMD1Bの発現や活性の変化は、脂質代謝の破綻やがん関連シグナルの文脈で検討されており、膜生物学のメカニズム研究において重要な標的となっています。

GRAMD1B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるGRAMD1B遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、GRAMD1B内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、GRAMD1Bのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GRAMD1Bタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、GRAMD1Bシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、GRAMD1B欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• GRAMD1Bの機能に不可欠なGRAMD1Bエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、GRAMD1Bゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• GRAMD1B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびGRAMD1B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、GRAMD1B遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  GRAMD1B HDRプラスミド（h）および GRAMD1B HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGRAMD1Bホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGRAMD1B標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。