GRAMD1B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-408929

Panoramica

GRAMD1B (GRAM domain-containing 1B) è una proteina di trasferimento del colesterolo ancorata al reticolo endoplasmatico (RE) che partecipa al trasporto lipidico non vescicolare nei siti di contatto tra reticolo endoplasmatico e membrana plasmatica. Legando il colesterolo accessibile tramite il suo dominio tipo StART e rispondendo ai segnali dei fosfoinositidi sulla membrana plasmatica, GRAMD1B contribuisce all’omeostasi del colesterolo, all’organizzazione di membrana e alla segnalazione dipendente dai lipidi. Questi processi si intersecano con il rilevamento degli steroli, le risposte allo stress del RE e una regolazione metabolica più ampia che influenza i programmi di crescita e sopravvivenza cellulare. Alterazioni dell’espressione o dell’attività di GRAMD1B sono state investigate in contesti di metabolismo lipidico deregolato e di segnalazione associata al cancro, rendendola rilevante per studi meccanicistici della biologia delle membrane.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GRAMD1B (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GRAMD1B in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GRAMD1B insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GRAMD1B a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GRAMD1B.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GRAMD1B per lo studio della segnalazione di GRAMD1B, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni GRAMD1B critici per la funzione di GRAMD1B
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GRAMD1B per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GRAMD1B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal GRAMD1B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GRAMD1B. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GRAMD1B Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR GRAMD1B (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GRAMD1B per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GRAMD1B definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.