GPRC5D CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403114-ACT

GPRC5D（Gタンパク質共役受容体クラスCグループ5メンバーD）は、上皮系の環境で高発現し、分化関連シグナルに関与するとされる、オーファンGPCR様の膜タンパク質をコードします。レチノイン酸応答性ファミリーの一員として、細胞状態に影響する転写プログラム、膜受容体シグナル伝達、微小環境との相互作用との関連が研究されています。GPRC5Dの発現変動は、血液悪性腫瘍、とくに形質細胞生物学に関する研究で報告されており、固形腫瘍や免疫腫瘍学のデータセットでも解析対象となっています。これらの特性により、GPRC5Dはヒト細胞における受容体連動型の制御ネットワークや系譜（ライン）関連表現型を調べるための有用な標的となります。

GPRC5D CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GPRC5Dの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GPRC5D CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GPRC5D 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGPRC5D転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GPRC5Dの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGPRC5D遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGPRC5D依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGPRC5D発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGPRC5D経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。