GPR88 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403566-ACT

GPR88 codifica um receptor órfão acoplado à proteína G que é altamente enriquecido nos neurônios espinhosos médios do estriado e ajuda a ajustar a excitabilidade neuronal e a transmissão sináptica. Por meio do acoplamento a proteínas G heterotriméricas, o GPR88 está ligado à modulação da sinalização dependente de AMPc, a cascatas de quinases a jusante e a programas transcricionais dependentes de atividade que moldam a função dos circuitos córtico-estriatais. Alterações na expressão ou na sinalização de GPR88 têm sido associadas a fenótipos neuropsiquiátricos e do neurodesenvolvimento, incluindo mudanças no controle motor, em comportamentos relacionados à recompensa e em processos cognitivos. Essas características tornam o GPR88 um alvo útil para dissecar vias reguladas por GPCR em modelos neuronais humanos e para estudar respostas de redes gênicas em células da linhagem estriatal.

GPR88 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GPR88 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GPR88 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GPR88 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GPR88, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GPR88. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GPR88 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GPR88 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GPR88 em células tumorais com expressão de GPR88 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.