GPR56 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-406370-NIC

ADGRG1 codifica o GPR56, um recetor acoplado à proteína G do tipo adesão, enriquecido em linhagens neurais e imunitárias, que integra sinais da matriz extracelular com a sinalização intracelular. O GPR56 participa em interações célula–célula e célula–matriz, modulando processos como a migração neuronal, o desenvolvimento cortical e a organização do citoesqueleto através de vias ligadas a GPCR, incluindo dinâmicas de actina impulsionadas por RhoA. Em contextos hematopoiéticos, o GPR56 tem sido implicado na regulação da adesão, do tráfego e dos estados funcionais de subpopulações de leucócitos, sustentando a investigação do posicionamento de células imunitárias e de programas de ativação. A atividade desregulada de ADGRG1/GPR56 tem sido associada a perturbações do neurodesenvolvimento e a alterações do comportamento de células tumorais, tornando-o um alvo relevante para estudos mecanísticos da sinalização de adesão e da diferenciação específica de linhagem.

GPR56 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus ADGRG1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de ADGRG1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função ADGRG1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com ADGRG1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.