GPR55 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-432690-ACT

O gene **Gpr55** de camundongo codifica o **GPR55**, um receptor atípico acoplado à proteína G, implicado na deteção de lípidos e na transdução de sinal a jusante de ligandos endógenos, como o lisofosfatidilinositol. A atividade do GPR55 pode envolver vias dependentes de **Gα12/13** e **RhoA**, modular a dinâmica do cálcio intracelular e influenciar a sinalização **MAPK/ERK**, ligando a ativação do receptor a alterações na organização do citoesqueleto e em programas de transcrição. Em contextos do sistema imunitário e do sistema nervoso, o GPR55 tem sido associado à regulação da sinalização inflamatória, à migração celular e à excitabilidade neuronal. A desregulação da sinalização ligada ao GPR55 tem sido investigada em modelos de inflamação, processamento da dor e homeostase metabólica, apoiando a sua relevância para estudos mecanísticos de fenótipos mediados por GPCR.

GPR55 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Gpr55 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GPR55 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Gpr55 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Gpr55, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GPR55. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Gpr55 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GPR55 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GPR55 em células tumorais com expressão de Gpr55 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.