Partículas Lentivirales de Activación (h) GPR54: sc-403766-LAC

KISS1R (GPR54) es un GPCR de clase A que se une a las kisspeptinas para regular la señalización del eje reproductivo y el inicio de la pubertad mediante el control de la actividad de las neuronas que liberan hormona liberadora de gonadotropinas (GnRH). Tras la unión del ligando, GPR54 se acopla predominantemente a Gαq/11 para activar la fosfolipasa C, elevar el Ca2+ intracelular y estimular la señalización dependiente de PKC, con efectos posteriores sobre programas transcripcionales de MAPK/ERK. Esta vía integra el control neuroendocrino con procesos celulares más amplios, como la secreción hormonal, la excitabilidad neuronal y la expresión génica. La desregulación o la variación genética en KISS1R se ha vinculado a trastornos del tiempo de la pubertad y al hipogonadismo hipogonadotrópico, y la señalización alterada se ha investigado en la biología tumoral relacionada con el sistema endocrino y en vías asociadas a la metástasis.

Las partículas de activación lentiviral GPR54 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de KISS1R en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral GPR54 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción KISS1R, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de GPR54. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo KISS1R y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.